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- 病毒RNA提取实验
病毒RNA提取实验
病毒RNA提取可以：（1）用于RNA病毒复制机制研究；（2）用于反向遗传学研究；（3）用于分子病毒学其他研究。实验方法
实验方法
TE-饱和酚/氯仿提取法
实验方法原理 大多植物病毒RNA 为单链RNA ，并且其极性与mRNA 极性相同，植物病毒RNA 提取较为简单，一般使用酚氯仿即可获得满意结果。 实验材料 试剂、试剂盒 仪器、耗材 抗体 实验步骤 展开一、实验材料准备
1. 材料
提纯TMV病毒液（10 mg/ml）。
2. 设备
冷冻台式离心机，低温真空干燥仪，电泳仪，电泳槽。
3. 试剂
TE-饱和酚:氯仿（1:1），氯仿，3 M NaAc(pH5.2)，乙醇(100%和70%)，TE缓冲液，无RNA 酶的双菌水。
二、操作步骤
1. 取一eppendorf管加入提纯TMV（10 mg/ml)400 ml，再加入等体积酚/氯仿，盖紧管盖后用手充分振荡1分钟，4℃下12 000 g离心10分钟。
2. 吸取水相于一新eppendorf管，再用酚/氯仿抽提，直至水相和有机相交界面无蛋白为止。
3. 吸取水相于新eppendorf心管，加入等体积氯仿，用手倒置离心管数十秒，4℃下12 000 g离心10分钟。
4. 取水相，加入1/10倍体积的3 mol/L NaAc(pH5.2)，2.5倍体积的冰冷乙醇，混匀，-20℃30分钟。
5. 4℃下12 000 g离心15分钟，小心弃去上清液，用70%乙醇洗涤沉淀，4℃下12 000 g离心5分钟。
6. 小心弃去上清液，沉淀真空干燥5分钟或空气干燥10分钟，并溶于无RNA 酶的双菌水或TE缓冲液中。
7. 取10 ml进行电泳分析。注意事项 1. 整个操作应尽可能在低温下进行。
2. 由于病毒RNA 镶嵌于外壳蛋白里面，因此要充分剥去病毒外壳蛋白，一般需要多次进行酚/氯仿的抽提。上海金畔生物科技有限公司
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